Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展比较慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现胰脏性疾病反应到显现1HG肾病病理病症的成果所部在成年人时期就有很好的叙述，多个胰脏性疾病反应中性的成年人里有70%在抗体转化后10年内入院肾病，而随访15年的成年人这一%-减小到84%。相对来说之下，占病理1HG肾病一半以上的HG1HG肾病的复发程序还没有人想得到必要的深入研究。

越来越多的人开始应用于分期系统对来界定1HG肾病的成果：群锥体在显现多种胰脏性疾病反应时进入第1期中，显现血糖近乎度时进入第2期中，显现病症时进入第3期中。一些多发胰脏性疾病反应中性的群锥体，在1期和2期，成果较比较慢，并发展为复发的1HG肾病。我们之前叙述了一一组在首次扫描到多种胰脏性疾病反应比对后至近乎多10年无肾病的近乎比较慢成果者，这一组病症人数近乎多，但相似性更加明确。随后，我们发现胰脏自身抗原特异性CD8+T巨噬细胞反应在成果较快的病症里必需不实际上，但在同类HG复发和长期实际上的肾病病症里很容易扫描到。这可能会算出事实，与成果病症相对来说，这些病症性疾病反应的调节增强。

早期深入研究算出事实，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但肾病病症实际上一些基本功能缺陷，其里以外对IL-2的反应灵活性减低。此外，肾病病症里的现象CD4+T巨噬细胞可能会对调节更具抵抗性，展现出为现象T巨噬细胞的诱发减弱，自然转化成的Treg和锥体外转化成的游离Treg，以及抗原年中的CD4+T巨噬细胞里IL-2反应减弱。本深入研究的用意是叙述了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一小群近乎较快成果者里的相似性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

分析方法：BOX深入研究是一项以人群为基础的纵向深入研究，在21岁以下肺炎的病症亲属里检查和1HG肾病的有可能会因素。我们之前叙述了长期较快成果者的相似性，他们保证多重胰脏性疾病反应中性多达10年，但没有人显现肾病的病理病症，比较慢性或非透过性性疾病。随后，10名在此之后保证无肾病并愿意透过大量血液比对的较快成果者纳入T和B巨噬细胞基本功能归纳。在目前为止的深入研究里，8名比较慢成果者(SP一组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏性疾病反应中性。所有的举例来说都位处1HG肾病成果的1期，尽管一些人随后失掉了胰脏性疾病反应对某些抗原的中性反应，然而，一名病症仍然位处2期至近乎多6年，但没有人显现病理病症，一名病症被病人为肾病，该成年人72岁，在搜集实验比对时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里对该供锥体透过了单独审核。剥离外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，转用多表达式流式巨噬细胞奥义和T巨噬细胞诱发试制审核供锥体里Treg的频所部、表HG和基本功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、连续性和重生)透过无统筹聚类归纳，审核Treg表HG。

结果：与保健供锥体相对来说，来自比较慢成果锥体的无意识CD4+T巨噬细胞的统筹聚类结果显示，抑制的无意识CD4+ Treg频所部减小，与糖皮质激素游离的TNFR具锥体细胞(GITR)理解减小有关。一名HbA1c上升的病症与成果较快者和匹配的对照一组相对来说，Treg对光有所大致相同。基本功能归纳算出事实，与保健供锥体相对来说，来自较快成果锥体的Treg介导的CD4+现象T巨噬细胞诱发明显受损。展现出为对现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134理解的诱发减小。

平面图1 深入的表HG归纳结果显示，CD4+Treg亚HG在比较慢成果配置文件里减小。由FlowSOM转化成的Treg室，挤满在来自所有供锥体的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上面物理解断定出10个元簇:无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)应用于9个大致相同Treg上面转化成的10个元簇的MST。每个路由值得一提的是一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在路由一组附近打磨。每个路由里的饼平面图声称单个上面的理解级别。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示既有上面理解。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)转化成平面图，以及FlowSOM定位的每个元簇的基岩。(e-l)相对金属量为每个metacluster箱子里央等分(金属量> 0.05%)确切为HD和SP一组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T巨噬细胞(l)。橙色白点值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 应用于CITRUS的预测模HG推测，Treg频所部的减小是成果较快的标志。分级依赖型(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的值得一提的是性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR理解透过剥离，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)一组以及供锥体SP 606(橙色)里CD25+ cd127的频所部简介平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型同构的箱子里央等分;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头引人注意的簇被定位为SP和HD配置文件之间的大致相同。(j)箱子里央等分结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)一组里，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对金属量(%-)。(k)直方平面图结果显示每个簇的表HG(粉红色)和Treg上面相对理解与时代背景理解(橙色);上列，闪存Treg_3;下面偷偷地，闪存Treg_4。时代背景与所有其他簇里上面的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与保健献血者相对来说，成果较快者无意识treg的GITR减小。每个无意识CD4+T巨噬细胞元簇(无意识T巨噬细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +无意识T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个理解上面的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的理解热平面图(sp606不以外在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR理解串联，结果显示直方平面图(c)和简介平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有供锥体以外，p< 0.05(橙色)供锥体SP 606和匹配的HD不以外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR理解，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橙色)串联，结果显示直方平面图(e)和简介平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自较快成果的CD4+ treg巨噬细胞压制现象CD4+T巨噬细胞的灵活性减低。SP一组用橙色的里央线和白点声称，HD一组用黑色的里央线和白点声称，橙色的里央线/白点声称供锥体sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被上面为CFSE, Treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠增殖巨噬细胞，人才培养3天后透过流式巨噬细胞奥义扫描。(a-d)与CD4+接收者者相对应的treg人才培养(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发总和。应用于中性对照(抑制的响应巨噬细胞不含treg)近似值诱发总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现象CD4+T巨噬细胞对较快成果的T巨噬细胞增殖的诱发更适合于。SP一组用橙色的里央线和白点声称，HD一组用黑色的里央线和白点声称，橙色的里央线/白点声称供锥体sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上面，treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠增殖巨噬细胞，人才培养3天后透过流式巨噬细胞奥义(CD25反染)和巨噬细胞因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发百分所部(b)。(c,d) CD25诱发百分所部(c)和CD134诱发百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养里的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们算出的事实是，来自较快成果子的增殖无意识CD4+Treg在GITR理解里想得到了扩展和丰富，强调了有利于深入研究Treg在1HG肾病风险群锥体里的关联性的实质。

原文来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28